判斷Anti-ACA11樣本是否完整,可通過?「初篩→驗證→確認」?三步快速判定,結果準確易操作:
第一步:外觀初篩(快速排除明顯降解)
觀察蛋白樣本狀態:
? 澄清透明,無渾濁、絮狀物或沉淀→無明顯降解,大概率完整;
? 出現渾濁、沉淀或分層→已經降解,樣本不完整。
第二步:內參WB驗證(核心判定依據)
將待測樣本和?新鮮提取的同來源正常樣本?,同時跑WB檢測擬南芥管家內參(Actin/UBQ,分子量約40kDa):
如果待測樣本的內參條帶和新鮮樣本相比,亮度、清晰度、條帶位置一致→樣本無明顯降解,整體完整;
如果待測樣本內參條帶明顯變暗、彌散模糊,或者無條帶→樣本已經降解,不完整。
第三步:靶標特征確認(針對ACA11特性驗證)
因為ACA11是低豐度膜蛋白,比內參更易降解,需要補充靶標驗證:
跑WB檢測ACA11,若能在?110~115kDa區間?檢出清晰單一條帶,信號強度和新鮮樣本無明顯差異→確認ACA11完整;
若內參正常,但ACA11無信號,或條帶彌散、位置偏移→說明ACA11已經降解,樣本不完整。
只有三步結果都符合要求,才能確認Anti-ACA11樣本完整,可用于后續檢測。